Websites using демонстрируют as a keyword

Princess Ballet Studio – это уникальная детская балетная школа студия для настоящих Принцесс возрастом от 3 до 15 лет. Идея создания студии принадлежит квалифицированному хореографу с уникальным опытом работы в американских и украинских танцевальных школах, Юлии Войтиной. На основании полученных знаний, ею была разработана оригинальная концепция обучения для детей. Главной целью детской балетной студииё "Princess Ballet Studio" ставит не только развитие творческого потенциала каждого отдельного ребёнка, но что немаловажно, делает упор на раскрытие артистического видения, умение взаимодействовать с партнёром, раскрепощенно подавать себя на сцене. В студии, помимо основного танцевального умения, дети приобретают также навыки общения со своими сверстниками, заводят друзей, которые имеют похожий круг интересов. Детская балетная студия "Princess Ballet Studio" Харьков с заботой и вниманием относится к своим воспитанницам,а также к родителям, что ярко демонстрируют условия, в которых проводятся занятия. Современные, комфортные залы и просторные раздевалки - неотъемлемая часть имиджа детской студии. С 2013 года в нашей студии создана программа для взрослых.Ниже приведен перечень занятий.

Частные и любительские фото мамаш, мамочек, и просто зрелых женщин. Дамы в возрасте иногда не менее желанны и привлекательны чем молодые и неопытные девушки, а потому и их домашние фото всегда популярны и востребованы. Темпераментные симпатичные дамы в возрасте демонстрируют свои шикарные голые тела и занимаются страстным сексом.

На сайте доступно к просмотру фото подборка самых шикарных зрелых женщин, которые обязательно поднимут вам настроение и еще кое что. Смотрите как эти развратные голые зрелые бабы демонстрируют свое хорошо сохранившееся тело, упругие сиськи и аппетитные попки. Фото пышных голых женщин за 50 лет и стройных зрелых мамаш с красивым телом и красивой не обвисшей грудью.

Наслаждайтесь HD сексом с очаровательными девчатами, которые демонстрируют свои прелести

Хорошая подборочка фото больших и небольших сисек крупным планом. Девушки демонстрируют свою красивую грудь. Пилотки женщин крупным планом. Женскя грудь крупным планом. Красивая гламурная киса показывает дырки перед камерой. Маленькая женская грудь, фотоподборка.

Порно фото зрелых женщин которые ежедневно пополняются новыми альбомами, смотрите онлайн. Так же смотрите порно фотографии женщин в возрасте, голые матюрки, развратные мамаши за 40 и голые бабы за 45. Категория для любителей порно баб и сексуальных женщин, которые уже немолоды, но еще не стары, а находятся в самом аппетитном возрасте. Взрослые дамы демонстрируют голые тела и занимаются страстным сексом.

Любительские фотографии молодых девушек и зрелых женщин, которые занимаются сексом на природе и в домашней обстановке. В этих галереях опубликовано только лучшее домашнее порно фото русской молодежи и семейных пар. Коллекция частной эротики, любительские эротические снимки, подборка частных эротических фото девушек не для публичного просмотра. Молоденькие, сексуальные девушки демонстрируют свои любительские порно фото и шикарную эротику.

Лучшие голые девушки и женщины занимаются сексом. Сказочные секс галереи охватят все ваши желания и фантазии. Наслаждайтесь удивительными красивыми порно фотографиями, смотрите и скачивайте бесплатно. У нас множество разнообразных домашних и любительских снимков, на которых очаровательные женщины демонстрируют свою наготу или вступают в половую связь. Наши девушки делятся самыми откровенными интим фото, и надеются.

Начни свое путешествие в мир VR со знакомства с играми и приложениями, которые наилучшим образом демонстрируют преимущество системы VIVE: технологию с возможностью перемещения внутри игровой зоны.

Симпатичные девушки без белья под юбками показывают письки и попки на лестничных площадках, на скамейках в парках, и в других общественных местах. На наших фото голые девушки показывают свою красоту и какие он сексуальные. Полюбуйтесь на эротические секси фото молодых голых девушек, красивые голые молодые девушки бесстыдно демонстрируют свои удивительные привлекательные обнажённые тела и соблазняют своей красотой.

Фото забрал сильнейших негров Смотрите фото Гневные женщины демонстрируют у кустов страсть 20 штук Приватные саше красных. ...

На этом сайте мы собрали фото, на которых очаровательные цыпочки демонстрируют свои упругие бразильские попки и сексуальные дойки. Как же очаровательны и прекрасны молоденькие, голенькие цыпочки. Внимание! На нашем сайте присутствует порно фото и порно видео онлайн сексуального характера.

Эротика и порно фото, видео с голыми девушками, красивые сиськи, письки и попы. Задорная девушка с красивыми сисями и попкой фото. Очень сексуальная девушка с красивой попой. Красивые сиськи и попы куколок - порно фото. Прекрасные двадцатилетние девушки выглядят очень свежо. Они смело демонстрируют свои хорошие натуральные груди, к счастью еще не обвисшие и упругие пятые точки.

Фото сексуальных девушек демонстрируют прекрасных представительниц своего рода красивых, раскованных, соблазнительных. Лучшие сексуальные и эротические фотографии девушек, по мнению наших читателей. Микс фотографий красивых девушек, которым есть что показать. Отличная подборка очень красивых и сексуальных девушек с бюстгальтерами и без.

Частные фото длинноногих красавиц, предпочитающих позировать в чулках или колготках. Домашние девушки в нейлоне очень сексуальны, и вы в этом сейчас убедитесь. На фото девушки в мини юбках без нижнего белья и других элементов одежды демонстрируют свои прелести.

Эротические фото сексуальных девушек. Голые стройные девушки всегда были популярны среди мужской части населения. Порция фоток стройных красоток и пышных любительниц с аппетитными формами, которые они без стеснения демонстрируют на всеобщее обозрение.

Подборка русских девушек в откровенной эротике. Частные ххх фото обнаженных русских девушек на отдыхе. Голые девушки позируют на пляже, в лесу, на фоне гор и даже на крыше дома. Смотрите как сексуально наши девки позируют голыми, и демонстрируют нам свои обнаженные женские прелести. Фотоподборка русских милашек.

В Кружевах.Ру рассказывает о новых тенденциях в мире нижнего белья и купальников, коллекциях нижнего белья от самых известных брендов, а также о работах новых перспективных дизайнеров. На нашем сайте вы найдете полезную информацию о том, как правильно подобрать нижнее бельё в зависимости от особенностей вашей фигуры.На нашем ресурсе вы также узнаете о жизни, работе фотомоделей и мировых знаменитостей, а также фотосессии модных гламурных журналов, в которых они демонстрируют новинки нижнего белья.

Голые девушки не стесняясь демонстрируют свои киски. Гигабайты отборной порнухи ждут вас на этом сайте. Окунитесь в беззаботный мир онлайн порно. Этот сайт будет полезен всем совершеннолетним лицам, которые интересуются сексом.

Порно фото галереи с молодыми девушками. Молодая пара фотографирует свой секс. Молодая девушка с мохнатой киской и пирсингом в соске. Молоденькие, сексуальные девушки демонстрируют свои любительские порно фото и шикарную эротику. Молодая стройная чувиха трахается с парнем на скамейке у дома.

Красивые обнаженные девушки демонстрируют свои прелести. Фото обнаженных фотосессий со всего мира.

Самые удивительные голые мульты фото, где разные мультипликационные герои занимаются сексом крупным планом и демонстрируют свои прелести, голые хентай картинки

Смотреть бесплатно русское порно, русский секс и фото эротики на СексМир.Инфо.Заходи и смотри эро фото, где голые бабы без трусиков демонстрируют свои тела. Эти девочки.<br /> Голые девочки в бане (90 фото) Частное фото голые девушки бесплатно.

Порно фотографии женщин в возрасте, голые матюрки, развратные мамаши за 40 и голые тетки за 50. Порно фото голых русских зрелых женщин с пышными дойками, большими задницами, лохматками или выбритыми пилотками. Желая привлечь к себе внимание, женщины за 40 позируют голыми в домашних фотосессиях. Создавая интригу самые стеснительные демонстрируют себя в сексуальном нижнем белье, позволяя себе показать лишь грудь и стройные ноги.

Голые.ру - голые девушки, откровенная фото эротика, видео, голые гифки и эротические рисунки, где голые девушки эротично демонстрируют свои прелести. | Голые.ру

Красивая эротика, скачать порно фото и эротические фотографии. Частные эротические и порно фото голых девушек невероятно сексуальны. Соблазнительные женщины демонстрируют свои тела без капельки стеснения. Развратные фото с одтыхы из домашнего фотоальбома. Девчонки без трусиков фото.

SPB WED EXPO – самая популярная в Санкт-Петербурге ежегодная свадебная выставка, в рамках которой свои услуги демонстрируют ведущие представители свадебной

Красивые зажигательные видео порево фотосессии</u> галереи были сфотканы на природе в домашних условиях и вы насладитесь нашими красивыми девушками.

Добавить фото Новое порно и эротика. Домашние фото огромных сисек тётки. Фото голых девушек в интимной обстановке. Частные и любительские интимные фото голых девушек невероятно сексуальны и эротичны. Соблазнительные женщины демонстрируют свои тела без капельки стеснения, ведь не все из них знали что их домашние порно фото попадут на всеобщее обозрение.

Здесь представлены качественные фото красоток с натуральной большой грудью. Сексуальная аккуратная блондинка с большими сиськами. Порочные мамочки демонстрируют возбуждающие тела. Сексуальные женщины за сверкают голыми телами дома.

Только посмотрите одно из онлайн порно видео пухлых девушек на нашем сайте и вы Просто представьте, как вы входите в эту пухленькую попку и начинаете ее иметь. Несмотря на лишний вес, эти пухленькие милашки трахаются ничуть не хуже худых девушек. Молодые девушки решили податься в порно индустрию, демонстрируют секс втроем. Молодой парень, трахнул толстую тётю с огромными сиськами.

Романтический секс на кухне. Гладкая свежевыбритая пизда русской красотки. Четыре милые, худые лесбиянки. Телка артистично показывает свою лохматку. Пикантные фото русских красавиц. Большая подборка фото на которых русские красавицы демонстрируют свои прелести.

Частное порно фото с красивыми женами. Реальное домашнее порно фото только с русскими участниками. Большинство женщин это замужние дамы, а так же есть молодые любовницы, молодые жены и проститутки. У нас множество разнообразных домашних и любительских снимков, на которых очаровательные женщины демонстрируют свою наготу или вступают в половую связь.

Сборник частных порно фото на которых голые женщины в разных позах демонстрируют кто сиськи, а кто попки с письками. Молодая пара занимается сексом в различных позах. Девушка акцентировала внимание на письке и показала её в разных позах и крупным планом. Голая и стройная блондинка крупным планом показывает вагину.

Красивые голые девушки, самые горячие, сексуальные и страстные женщины собраны в этом сайте. Красивые девушки демонстрируют все прелести молодого тела. Русские порно актрисы и наши обычные девчонки покажут, как страстно умеют заниматься сексом. Профессиональное и любительское видео молодых пар.

Красивые девушки медленно раздеваются и демонстрируют свое красивое нижнее белье. Эротические фото девушек в нижнем белье. Брюнетка в сексуальном красном белье. Куколка в салатовом сексуальном наряде. Шикарная блондинка в красивом белье. Смотреть порно видео девушки в красивом нижнем белье.

Домашнее фото анала - секс в попу с женой, подружкой, любовницей. Фото как дерут в очко, грубый и глубокий трах в жопу. Попки голых жен в домашнем порно. У нас множество разнообразных домашних и любительских фото, на которых простые девушки демонстрируют свою наготу или занимаются сексом.

Милые и красивые девушки в порно. Девушка в чулках приняла большой член в тугую попку. Красивый секс начинающих молодых порно звезд, которые демонстрируют супер секс в отличном качестве.

Выберите своё основное преимущество У каждого игрока будет своё основное преимущество, которое он будет стараться воплотить в игре. Кто-то банально не знает, что в покерном вообще существуют телсы, поэтому такие игроки будут надеяться исключительно на силу рук и на своё мастерство. Однако, складывается ощущение, что 70% успеха в покере зависит не от того, насколько сильная рука вам зашла, а от того, как вы презентуете свою руку. Найти игрока, который будет разыгрывать свои руки практически идеально (с точки зрения математики и техники) – не сложно. Значительно сложнее найти игрока, который будет разбираться в чтении своих оппонентов. А поскольку прочитать карты своего оппонента – это тоже искусство не из лёгких, да и наверняка это сделать практически невозможно, то нам остаётся полагаться лишь на чтение соперников. Моменты, на которые необходимо обращать внимание За столом нужно наблюдать «правильно». Да-да, вы не ослышались. Не забывайте, что против вас будут играть профессионалы и любители. Одни могут давать прямые телсы, а другие – обратные, чтобы постараться запутать вас. Начинать любой процесс наблюдения необходимо с того момента, когда вы только садитесь за игровой стол. Просто осмотрите всех покеристов. Возможно, среди них вы сразу найдёте несколько знакомых лиц, о стиле игре которых вы что-то да знаете. Про остальных следует отметить их поведение за игровым столом, насколько живо они держатся вне раздач, и как меняется их мимика, когда они собираются вступить в раздачу. Обратите внимание на то, как одеты люди, насколько их одежда соответствует покерным трендам. Так, например, человек, одетый в официальный костюм и при галстуке или бабочке, скорее всего, будет игроком-бизнесменом. И, напротив, молодой парень лет 25, пришедший в шортах и яркой майке в солнцезащитных очках, скорее всего, будет онлайн-регуляром. Обращайте внимание на то, как соперники обращаются с фишками. Опытные игроки стараются не скрывать своих способностей в манипулировании фишками и охотно демонстрируют различные трюки. Более того, шафл фишек – это привычный ритуал, которым владеют все игроки, которым приходилось отыграть пару-тройку оффлайн турниров. Базовая поведенческая линия Постарайтесь отметить для себя, как человек ведёт себя в спокойной ситуации, когда не принимает участия в раздачах или ещё до того момента, когда игра началась. Обратите внимание на то, в какой позе он сидит, как держит руки, ноги, куда смотрит и т.д. Не упускайте из внимания даже такие мелочи, какими жевательными движениями он пользуется, когда у него во рту находится жвачка. Предположим, что ваш оппонент обычно держит руки на столе в одной и той же позе. А в критической ситуации он либо убирает руки со стола, либо начинает двигать ими. Этот телс уже говорит нам о том, что человек нервничает. По какой причине он это делает? Это следующий вопрос, на который необходимо искать ответ. Обращайте внимание на то, как держатся игроки, когда им только-только сдают карты. Это, так называемые, общие телсы. Такое название они получили, поскольку свойственны подавляющему большинству игроков. Приведем один пример, чтобы вы поняли, о чём идёт речь. Например, когда оппонент слишком энергично бросает фишки в банк или через чур активно начинает защищать свои карты, это говорит о том, что у него хорошая рука. Более подробно об этих телсах мы поговорим в следующих главах. Важно стараться найти и индивидуальные телсы, которые будут характерны не большинству, а одному конкретному игроку. Самый простой пример – для колла игрок берет фишки правой рукой, а для рейза – левой. Поведенческие шаблоны Собирать поведенческие факторы необходимо постоянно, поскольку они смогут дать вам те необходимые подсказки, на которые вы и будете опираться, принимая то или иное решение. Внимательно следите за игроками в раздаче. Если соперник кусает губы и сбрасывает карты, вам необходимо понять, делает он так постоянно – или это единичный случай. Если за ним будет намечаться такая тенденция постоянно, можете использовать эту черту соперника, как телс. О чём он может говорить? О том, что у соперника рука посредственной силы, а делать херо-коллы он с ней не хочет. Но нельзя сводить своё наблюдение к стремлению выявить один-два телса. Чем больше подсказок у вас будет, тем более точное решение вы сможете принять. Ведь, чем больше подсказок будет предоставлять вам оппонент, тем бОльшей информацией о нём вы будете владеть. Этот процесс можно сравнить с собиранием головоломки: чем больше фрагментов вы поставите на свои места, тем более чёткая картина у вас будет складываться в голове о том, что получается в итоге. Например, в начале раздачи игрок сидел напряжённо, а после выхода ривера видно, что он расслабился. Эти телсы говорят нам о том, что сильной руки у него нет. Возможно, у него промахнувшееся дро или любая другая комбинация, которую мы можем выбить, сделав плотную ставку. Когда покерист откидывается от стола, это значит, что у него на руках нет сильной комбинации. Но когда вместе с этим телсом он ещё и сцепливает руки у себя за головой, этобудет означать совершенно противоположное. Не забывайте про мелочи Порой, соперники будут давать вам такие телсы, не заметить которые будет практически невозможно. Однако, такие случаи будут редки. В большинстве случаев вам придётся стараться высматривать самые маленькие и незначительные подсказки. Например, если после того, как раздали флоп, игрок быстро сцепил свои пальцы рук, а после – быстро расцепил, скорее всего, у него сильная рука. Ведь если углубиться в психологию, станет понятно, что сцепление пальцев вместе – это жест высокого доверия, а расцепление – жест низкого доверия. Но поскольку эти телсы идут за другом, верить, скорее, нужно первому из них. Если игрок резко выпрямляется – это не говорит о том, что ему неудобно. Скорее, это говорит о том, что у него проснулось повышенное внимание и интерес к этой раздаче. Следовательно, либо ему раздали хорошие карты, либо он неплохо попал во флоп.

На этом сайте вы найдете фото и изображения голых натуральных сисек простых девушек и женщин. Молодая шлюшка в одной короткой юбке. Молодые красотки сами снимают себя на телефон и выкладывают интимные фото своих сисек и кисок в сеть. Фото с красивыми девушками, которые демонстрируют нам свои голые молоденькие сиськи.

Красивые девушки демонстрируют все прелести молодого тела. Пердолят красивых черных девушек с аппетитными попками и длинными ногами. Телок долбят глубоко в глотку и между сисек. Самая сладкая подборка порно HD роликов - сделано с любовью.

Очень горячие снимки из семейного фотоальбома. Такие фотографии непринято показывать своим родственникам и близким друзьям. Частное порно из семейного альбома жены и мужа. Частные фото семейной пары, интимные фотки голых жён, домашние фотографии секса с женами. Фотографии 30-летней жены из семейного архива демонстрируют её в купальнике, эротическом белье, шубе на голое тело.

Красивые фото голых толстушек на любой вкус! Обнаженные девушки-пышки и сексуальные толстые женщины демонстрируют себя во всей красе.

Социальная сеть о котах, породы кошек, видео, фото и картинки котят..Самые дорогие кошки в мире.Недорогое и правильное питание в кошачьем питании.Кошачий периодонт. Специфика заболевания и как лечить..Отодектоз у кошек.Заболевания глаз у кошек: симптомы и помощь.Как приручить дикого котенка или кошку?.Чем кормить котят до года?.Расчёсывание – один из методов ухода за кошкой.Мне нравятся пумы, а вам?.Чем кормить шотландского котенка в первый год жизни.Как ухаживать за кошками преклонного возраста.Что делать, если в доме скоро появится шотландский котенок.Как определить, что коты демонстрируют вам свою любовь.Лечение инфекционного перитонита у кошек.18 доказательств того, что коты — многогранные личности С Адме.ру.Facebook и забавные котики с его просторов.Интересные фотки котиков с Фейсбука с прикольными подписями.AdMe.ru: 22 причины, почему люди никогда не перестанут любить котиков.

Мы с удовольствием покажем как обнаженные русские красавицы будут позировать на фото. Самые симпатичные девушки без комплексов демонстрируют желанные тела, свои аппетитные фигурки с вкусными попками. Частная фото коллекция русской девушки с необыкновенной красотой.

Канцер можно категоризировать в две группы: канцер, частота которого увеличивается с возрастом, и канцер, следующий из ошибок в процессе развития млекопитающих. Первая группа связана с ДНК репликацией и накоплением генетических мутаций, которые наблюдаются в процессе пролиферации онтогенетически приобретенных стволовых клеток, инициирующих и поддерживающих ткани и органы. Эти мутации, которые являются результатом ошибок репликации ДНК и также экологических инсультов, делятся на две категории; мутации, которые инициируют канцерогенез, и геном-дестабилизирующие мутации, которые способствуют анеуплоидии через избыточную геномную дупликацию и хроматидную миссегрегацию. Повышенная геномная нестабильность приводит к ускоренной клональной эволюции, приводящей к появлению более агрессивных клонов с повышенной лекарственной резистентности. Вторая группа раковых заболеваний, называемых герминативными опухолями, является результатом ошибочной локализации плюрипотентных стволовых клеток во время раннего развития. Во время нормального развития плюрипотентные стволовые клетки, появляющиеся у ранних эмбрионов, приводят к зарождению всех клеточных линий у эмбрионов и взрослых, но в случае их перемещения в эктопические области, они продуцируют опухоли. Примечательно, что плюрипотентные стволовые клетки, как и многие раковые клетки, зависят от протеина геминин (Geminin) для предотвращения избыточной репликации ДНК от инициирования повреждение ДНК-зависимого апоптоза. Эта связь между контролем репликации ДНК во время раннего развития и герминативными опухолями показывает, что геминин является потенциальной химиотерапевтической мишенью в эрадикации раковых прогениторных клеток. КАНЦЕР Что такое канцер? Термин «рак»  описывает опухоли и другие формы аномального роста ткани (неоплазия). В целом, рак обладает 10 признаками: самодостаточность в ростовых сигналах, нечувствительность к антиростовым сигналам, уклонение от апоптоза, неограниченная пролиферация, устойчивый ангиогенез, инвазия в окружающие ткани и метастазы в отдаленные области, использование аномальных метаболических путей для генерации энергии (например, гипотеза Варбурга), уклонение от иммунной системы, нестабильность генома и хроническое воспаление. Таким образом, раковые клетки отличаются от нормальных клеток в их способности пролиферировать в условиях, невозможных для нормальных клеток, а также мигрировать и инициировать рост в новых локализациях. Какова вероятность развития рака? Рак занимает второе место после болезней сердца как ведущая причина смерти в США и во всем мире. На долю рака приходится 68% всех смертей от неинфекционных заболеваний во всем мире и 23% всех смертей в США. В 2016 году у около 1/200 человек будет диагностирован раком; около 35% умрут от болезни (Centers for Disease Control). Рак можно разделить на три группы по возрасту . После половой зрелости заболеваемость раком экспоненциально возрастает с возрастом, так что около 1% мужчин и женщин переносят рак к 60-летнему возрасту (рис. 1A). Таким образом, большинство типов рака - это болезнь старения, за который ответственны, главным образом, накопление генетических мутаций и хромосомных аберраций, хотя другие процессы, связанные со старением, также могут вносить вклад. Например, аккумуляция стареющих клеток и высокое воспаление, по-видимому, способствуют началу и росту рака. Однако частота определенных онкозаболеваний ингибируется с возрастом (рис. 1В). Старение сосудов и снижение уровней гормона роста, по-видимому, редуцируют инициирование и рост рака. Частота рака щитовидной железы, шейки матки и матки постоянна примерно в 30 лет, а частота тонзиллярного рака в основном ограничена людьми в возрасте около 60 лет. Однако наиболее яркими являются герминативные опухоли, которые наблюдаются прежде всего у новорожденных, подростков и молодых людей. Частота тестикулярного рака, например, достигает пика в возрасте около 35 лет, когда он встречается у примерно 0,01% мужчин (рис. 1С). Рисунок 1. Инцидент различных типов канцера - функция возраста. Частота рака на 100 000 человек как функция возраста населения Соединенных Штатов за 10-летний период 1999-2009 годов . Данные для мужчин и женщин объединены, за исключением указанных случаев. (A) Возраст-зависимые раковые заболевания представлены раком желудка, толстой кишки, легкого, молочной железы (женщины), предстательной железы, мочевого пузыря, головного мозга, лимфом, лейкозов и меланомы; (B) Возраст-ингибируемые раковые заболевания представлены раком миндалин (фиолетовый), щитовидной железы (светло-зеленый), шейки матки и матки (темно-зеленый); (C) Герминативные неоплазии представлены раком яичка. Каковы истоки рака? Есть две гипотезы о происхождении канцера человека. Первая, рак - следствие генетических мутаций, которые или наследуются, или приобретаются вследствие ошибок в ДНК репликации и средовых нарушений . Эта теория объясняет корреляцию между старением и риском развития рака . Вторая теория состоит в том, что рак следует из раковых стволовых клеток (CSC), которые сохраняют способность бесконечно пролиферировать без потери их способность инициировать бесконтрольный рост, ведущий к раку . Все раковые клетки могут размножаться в условиях,  невозможных для нормальных клеток, но только CSC могут инициировать опухоль de novo. Окончательное доказательство существования CSC было впервые сообщено для лейкемии , а затем распространено на солидные опухоли. Эти две теории не являются взаимоисключающими, поскольку CSC могут возникать во время развития млекопитающих путем накопления генетических мутаций. Альтернативно, CSC могут представлять активацию покоящихся стволовых клеток, которые пробуждаются в чужеродной среде (в эктопическом локусе) и отвечают на пролиферативные и миграторные сигналы, для ответа на которые они были не запрограммированы. Внутренние против внешних факторов риска Хорошо известно, что частота рака среди различных тканей и органов распределяется неравномерно как во времени, так и в пространстве; в некоторых типах тканей рак человека развивается в миллионы раз чаще, чем других типах тканей. Непонятно, что вклад врожденных рисков для развития конкретного рака в течение жизни, например, случайных мутаций, которые происходят во время пролиферации стволовых клеток, против вклада внешних рисков, таких как вирусы, химические канцерогены и радиация. Путем математического анализа Томасетти и Фогельштейн (Tomasetti and Vogelstein) пришли к выводу, что риск развития рака на протяжении всей жизни сильно коррелирует с общим числом делений нормальных самообновляющихся клеток, поддерживающих гомеостаз ткани . Эти тканевые прогениторные клетки должны образовываться из тканеспецифических стволовых клеток, продуцируемых во время эмбрионального развития. Прижизненный риск развития рака в течение жизни был рассчитан против числа делений стволовых клеток в 31 типе тканей, для которых были количественно оценены стволовые клетки (рисунок 2). Результаты показали резкую корреляцию между этими двумя параметрами на пять порядков. Более того, они показали, что рак с известными наследственными факторами риска чаще встречается в некоторых тканях, чем в других. Например, мутации гена семейного аденоматозного полипоза (Familial Adenomatous Polyposis Coli) в 30 раз более вероятно вызывали колоректальный рак, чем рак двенадцатиперстной кишки, по-видимому, вследствие того, что толстому кишечнику требуется ~ 150-кратное количество делений стволовых клеток, чем двенадцатиперстной кишке. Напротив, внешние факторы риска, такие как курение, вирус гепатита С или папилломавирус человека, значительно повышают риск развития рака в легких, печени и головы/шеи соответственно. Например, у курящх людей в 18 раз чаще развивается рак легких. Эти результаты показывают, что только 30% вариаций риска рака среди тканей объясняются факторами окружающей среды или наследственными предрасположенностями. Большинство типов рака являются результатом случайных мутаций, возникающих при репликации ДНК в нормальных стволовых клетках, необходимых в процессах развития и поддержания тканей. Рисунок 2. Различия в риске развития рака среди разных тканей можно объяснить общим числом делений стволовых клеток в этих тканях . Общее число делений клеток в течение среднего времени жизни человека, умноженное на количество стволовых клеток в ткани (ось х), было нанесено против прижизненного риска развития рака этого типа ткани (ось y) для 31 типа тканей, в которых было определено количественно стволовых клеток. Только на 9 из 31 канцера значительно повлияли на внешние факторы (например, курение (желтый)). Наследственные факторы риска встречались чаще в определенных тканях (например, мутации FAP гена (зеленый)). Сокращениями являются остеосаркома (OS), семейный аденоматозный полипоз (FAP), вирус гепатита С (HCV), папилломавирус человека (HPV), хроническая лимфоцитарная лейкемия (CLL) и острый миелоидный лейкемий (AML). Ву (Wu) и коллеги пришли к выводу, что корреляция между делением стволовых клеток и риском рака не проводит различия между внутренними и внешними факторами . Они пришли к выводу, что скорости мутаций, вызванных внутренними факторами, не могут объяснить наблюдаемые риски рака и что от 70% до 90% распространенных видов рака вызваны внешними факторами. Для решения этой головоломки, Чжу (Zhu) и его коллеги картировали частоту рака в различных органах новорожденных и взрослых мышей . Их стратегия заключалась в том, чтобы обойти необходимость учитывать внешние факторы, сопоставляя судьбу стволовых клеток, которые уже содержали онкогенные факторы риска, тем самым выявляя только роль канцерных драйверных мутаций, вместе с количеством делений стволовых клеток, которые наблюдались в каждом органе с течением времени. Их результаты показали, что риск развития рака у человека в значительной степени связан с прижизненной генеративной способностью мутантных клеток (рис. 3). Если стволовая клетка находилась в состоянии покоя, она не вызывала рака, независимо от наличия или отсутствия онкогенных мутаций. Если стволовые клетки подвергались множественным генерациям, частота рака в значительной степени зависела от количества делений стволовых клеток, а также от наличия онкогенной драйверной мутации. Это соотношение было истинным в присутствии множественных генотипов и независимо от стадии развития, сильно поддерживая представление о том, что частота пролиферации стволовых клеток диктует риск развития рака среди органов, как это было предложено Томасетти и Фогельштейном. Рисунок 3. Генерирующая способность стволовых клеток органа детерминирует прижизненный риск развития канцера в этом органе . Кроме того, внешние факторы специфично конвергируют на стволовые клетки с индукцией мутаций и/или повреждением тканей, что провоцирует пролиферативную репарацию. Ткань-специфическая восприимчивость стволовых клеток к индуцированным мутациям и их врожденная или повреждение-индуцированная пролиферативная способность создает «идеальный шторм», который в конечном итоге определяет риск возникновения рака в органах. Тем не менее внешние факторы, такие как повреждение тканей, могут играть ведущую роль. Онкогенные мутации, которые были введены в стволовые клетки нормальной печени взрослых, были недостаточными для индуцирования опухолей, поскольку эти клетки находились в покое. Однако, когда частичная гепатэктомия индуцировала клеточную пролиферацию, и трансформированные стволовые клетки продуцировали рак. Таким образом, канцерогенные свойства определенных внешних факторов могут быть связаны исключительно с индукцией ими локального повреждения тканей и активации восстановления клеток, тем самым ускоряя клеточную пролиферацию, которая способствует трансформации клеток. В этой модели риск рака органов определяется сочетанием факторов: врожденной пролиферативной способностью популяции стволовых клеток, инцидента локального повреждения тканей, вызывающего клеточную пролиферацию, и восприимчивости этих клеток к мутациям, которые могут трансформировать их в канцер. Клональная эволюция канцера За редким исключением спонтанные опухоли происходят от единичной клетки. Тем не менее, во время клинического диагноза большинство опухолей человека демонстрируют поразительную гетерогенность, такую как экспрессия рецепторов клеточной поверхности, пролиферация и ангиогенез, для которых имеются убедительные доказательства сосуществования генетически дивергентных клонов раковых клеток в опухолях . Такая гетерогенность опухоли может быть идентифицирована различиями в морфологии клеток, геномной ДНК и профилях экспрессии генов, которые позволяют классифицировать опухоли в подтипы. В «модели клональной эволюции» типы мутаций будут меняться по мере развития рака, так что отдельные раковые клетки станут более трансформированными и агрессивными. Фактически, ДНК секвенирование у онкобольных подтвердило последующее и независимое накопление генетических мутаций при метастазировании исходной опухоли . Филогенетический анализ мутаций в отдельных метастатических очаах, предполагает разветвленную ветвистую эволюцию опухоли с 63-69% всех соматических мутаций, которые не обнаруживаются в каждой опухолевой области . ДНК РЕПЛИКАЦИЯ И КАНЦЕР Главная директива, которая управляет циклом митотического деления клеток, состоит в том, что ядерный геном дублируется только один раз, когда клетка делится . Надежные нормативные сети обычно ограничивают репликацию ядерной ДНК одним полным дублированием генома каждое деление (рис. 4). Сборка и активация протеинов репликации в селективных областях вдоль ядерной ДНК ограничивается M→G1 и G1→S транзитом, соответственно. Источник разрешения активно предотвращается в течение S и ранней M-фазы, и механизмы действуют во время фазы G2 через цитокинез, чтобы гарантировать, что каждая дочерняя клетка получает одно ядро с двумя полными наборами хромосом. Рисунок 4. Цикл митотического деления клеток млекопитающих состоит из пяти фаз. В течение G1-фазы клетка увеличивается в размерах и разрешает начало своей репликации путем сборки предрепликационных комплексов в процессе подготовки к репликации ядерной ДНК (называемой «лицензирование начала»). S-фаза начинается, когда лицензированные начала репликации далее упорядочиваются в прединициирующие комплексы, которые активируются двумя отдельными протеинкиназами для инициирования двунаправленной репликации ДНК. G2-фаза представляет собой короткий период времени между окончанием репликации ядерной ДНК и началом митоза (называемой М-фазой). Митоз - это разделение гомологичных пар хромосом в два идентичных ядра, каждый содержащий 2N ДНК. Цитокинез - это разделение бинуклеатной клетки на две клетки. Для гарантии, что дочерние клетки получают одну и только одну копию генома, разрешение начала ограничивается M→G1 тразитом, а активация начала ограничивается S-фазой. Исключения из этого правила являются редкими, и те, которые действительно происходят, регулируются в целях продукции окончательно дифференцированных, жизнеспособных, непролиферирующих клеток путем мейоза, неудавшегося цитокинеза, эндомитоза или эндорепликации (бокс 1). BOX 1. Онтогенетически регулируемые изменения в плоидности Мейоз - После репликации ДНК следуют два раунда митотического деления клеток в отсутствие репликации ядерной ДНК с генерацией четырех клеток, каждая из которых имеет половину числа хромосом в качестве исходной родительской клетки. Гаплоидные зародышевые клетки (сперматозоиды и ооциты) возникают через диплоидные зародышевые клетки, подвергающиеся мейозу. Неудавшийся цитокинез - Миокардиоциты и гепатоциты являются результатом неудавшегося цитокинеза, который продуцирует двуядерную тетраплоидную клетку (одна клетка с двумя ядрами, каждая с содержанием 2N ДНК) . Бинуклеатные тетраплоидные клетки могут завершить успешный клеточный цикл плюс митоз, генерируя одноядерные тетраплоидные клетки, где каждое ядро - 4N. Повторение этих событий объясняет редкие октоплоидные и гексадекаплоидные клетки. Продолжение дописываю